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電気泳動用ゲルの作り方
電気泳動で用いるアガロースゲルを作成する。
器具と試薬等
電気泳動用アガロース， ゲルメーカー， ビーカー TAEバッファー※
※ TAEバッファー：電気泳動の際に用いるバッファー。
TAEバッファー50倍液［ Tris 121 g，酢酸28.6 mL，0.5 M EDTA pH 8.0 50 mL，
メスアップで500 mLにする。］ 50倍液を50倍に希釈して使用する。
電気泳動装置の泳動槽に入れるほか、アガロースゲルの作成にも用いる。
手順
① ビーカーに電気泳動用アガロース0.4gをTEAバッファー20mLに加え、
ビーカーを振って混ぜる。2％アガロース溶液となる。この段階では溶解しない。
② ビーカーを電子レンジで加熱する。（突沸しないように注意する。突沸すると気泡が入って扱いにくくなる。
電子レンジの中を見ながら、突沸しそうになったら止める。）
※透明で均一な状態になるまで加熱を繰り返す。熱いので気をつける。
③ 60℃程度に冷えた段階（ビーカーをさわって持てる程度なら良い）で、
枠をゲルメーカーにセットしてゲルを入れる。
④ 溶液が全体に広がった段階でコウムを差し込み、ゲルが固まるまで放置する。
コウムは上側と下側でウェルの幅が異なる。今回は小さい方（数の多い方）を使用する。
ゲルに気泡がある場合には、固まる前にガラス棒などを使って取り除く。
⑤ ゲルが固まったらコウムを外し、枠ごとゲルを取り出す。
すぐに使わない時は、ゲルは枠に入ったままの状態でタッパーに入れて
TAEバッファーに浸して冷蔵庫で保管する。
参考 アガロースゲルの濃度
今回の実験では、2%のアガロースゲルを用いるが、試料のDNAの大きさによって、適切なアガロースの濃度が違ってくる。
%Agarose 分離に適したDNA サイズ
0.7% gel ＞5 kbp
1.0% gel 1 kbp ～ 5 kbp
1.5% gel 200 bp ～ 3 kbp
2.0% gel ＜500 bp
基本操作
マイクロピペットの使い方
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