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制限酵素によるDNAの切断
増幅したPCR産物を制限酵素によって分断する
器具と試薬等
［試料］ Ⅱで作成したPCR産物（無印のPCRチューブ 20μL入っている）
［試薬］ 制限酵素EcoRVミックス※（黄色の0.2mLチューブ 8μL）
※EcoRVミックスの成分（20μLあたり）
10×Hバッファー 4.0μL（NaClの濃度が高い緩衝液）
EcoRV（制限酵素） 0.5μL 蒸留水15.5μL 切断認識塩基配列はこちら
［全体］ 37℃恒温槽、小型遠心機（スピンダウン用）， ボルテックスミキサー
［各班］ マイクロピペット（20）、ピペットチップ、0.2mLPCRチューブラック、
チューブフロート
手順
① 制限酵素（EcoRV）の入ったチューブ（黄色印）に、PCR産物を4μL入れる。
微量なのでチップの先をチューブの内壁面につけて出して、
PCR産物が確実にチューブに入ったことを確認するとよい。（水玉ができる）。
② チューブの蓋を閉め、スピンダウンする。
③ 蓋をしてボルテックスミキサーで攪拌し、小型遠心機でスピンダウンする。
④ フロートにさして、37℃の恒温槽に浮かべ、1時間反応させる。
（時間が許せば、3時間ぐらい反応させると良い。）
ここまでの処理で得た試料Tを、基本セットの他の試料に加えてアガロースゲル電気泳動で用いることになる。
アガロースゲル電気泳動
基本操作
マイクロピペットの使い方 ゲルの作製
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